双特异性抗体轻重链错配的质谱高分辨拆解策略
探讨利用完整蛋白去糖基化结合高分辨飞行时间质谱技术,在非还原与还原条件下快速区分同源二聚体与异源二聚体分子量差值的操作规范。
飞鸟首页|J9国际集团中国官网网站集成超高分辨质谱仪群组、表面等离子共振芯片系统及微流控毛细管电泳设备,针对重组蛋白、抗体偶联药物(ADC)、膜蛋白复合体及微量组织裂解物,提供全长分子量测定、肽图覆盖率比对、非标记与同位素标记定量质谱解析,确保实验数据具备可复现的科研与审计追踪标准。
分析准确率
99.85%
质控基准规范
CNAS / GMP
样本年吞吐量
40,000+ 份
针对高校课题组长期连续监测以及生物技术药企高通量靶点筛选需求,平台建立多层级前处理与上机时长折算机制。
适合先导化合物验证或单克隆抗体初筛,包含酶解纯化、一次质谱全扫描与完整谱图数据库回溯。
提供标记定量(TMT/iTRAQ)或DIA无标记深度分析,免费附带主成分分析(PCA)与GO/KEGG生物信息学注释。
涵盖电荷异质性、糖型相对比例测定、宿主细胞蛋白(HCP)残留监控,执行双人复核校验签字。
平台针对不同物理化学表征需求,部署模块化检测流水线。下表详述三类主力分析方案的技术指标。
| 检测维度与关键参数 | 高分辨质谱定性定量 | SPR 分子亲和相互作用 | 毛细管电泳与完整蛋白理化分析 |
|---|---|---|---|
| 核心测试目的 | 序列覆盖度、PTM位点、相对/绝对定量 | 结合速率常数(Ka)、解离速率常数(Kd)、亲和常数(KD) | 分子量纯度、电荷异质性、等电点(pI)分布 |
| 样本纯度及起始量要求 | 纯度≥80%,蛋白量≥5-10 μg | 纯度≥90%,配体10-50 μg,分析物适量 | 纯度要求宽泛,浓度≥0.5 mg/mL,体积≥20 μL |
| 仪器系统配置 | Orbitrap高分辨质谱 + 超高效纳升液相 | 双通道/八通道金片SPR传感器工作站 | 全自动毛细管等电聚焦与毛细管凝胶电泳系统 |
| 交付成果形态 | 鉴定列表、修饰位点谱图、定量热图、RAW数据 | 传感图谱动力学拟合曲线、解离常数拟合参数表 | 电泳色谱图、主峰及酸/碱性变异体相对百分比 |
| 质量保证机制 | 标品BSA定期质控、假发现率(FDR<1%) | 参比通道扣除、溶剂效应校正、芯片活性监测 | 系统适用性测试(SST)先行判定合格 |
针对论文补充实验返修(Minor Revision)或药监申报材料补充检测,平台开放前处理快速通道,专人对接前置实验方案。
根据生物大分子科研与生产质控场景,平台标准化固化了系列高复用性分析流程。
采用纳升电喷雾反卷积技术,精确计算大分子实际分子量与理论差值,快速识别截短体与二硫键配对失误。
利用胰蛋白酶、Glu-C等多重酶组合切胶,实现序列覆盖率接近100%,明确糖基化、脱酰胺与氧化发生位点。
无荧光标记实时监测受体-配体、抗体-抗原结合过程,解析结合快慢与解离难易程度,获取KD值。
分析数据的可溯源性是实验科学的底线,以下为合作单位在样本复测与数据核对中的运行反馈。
“针对低丰度磷酸化富集样本,该平台的质谱信号信噪比控制优异,谱图比对库准确区分了同重异位肽段,为我们课题组关于激酶级联响应的论文提供了直接佐证。”
“我们申报IND过程中需要进行全面的电荷异质性与宿主蛋白残留验证,平台的毛细管等电聚焦重复性极佳,出具的原始数据附带完整的SST检验合格记录。”
“SPR结合动力学测试的响应曲线平稳无漂移,通过溶剂校正准确排除了DMSO假阳性信号,对我们小分子化合物靶向筛选阶段的亲和力分级提供了真实支持。”
打破传统实验室手工处理周期冗长、多仪器接口不统一的瓶颈,实现全自动化前处理与高维数据融合。
保密协议保障 (NDA)
送样前签订保密条款
RAW 原始数据存储
多重冷备保存至少3年
复测仲裁支持机制
基线异常启动备份复检
药典合规报告模板
支持中英双语格式导出
追踪前沿质谱裂解技术进展,分享实验前处理优化方案与谱图解析经验。
解答关于送样浓度限制、缓冲液盐分兼容性及数据合规交付的核心问题。
质谱离子化过程极度敏感于非挥发性盐与去垢剂。样本中应严禁含有高浓度甘油(建议<0.5%)、SDS(需控制在0.1%以下)、Triton X-100或超过100mM的NaCl/PBS。若不可避免,送样时请明确备注,我们将采用超滤置换、C18除盐柱或反相脱盐柱进行前置纯化。
平台常规配备 Proteome Discoverer、MaxQuant、Spectronaut 以及 Mascot 检索系统。支持 UniProt、NCBI 官方参考蛋白质组数据库,并支持客户上传自定义表达载体多肽序列进行定向比对。
平台配置纳升流速色谱(nanoLC)结合微通道捕集柱技术,对于低至10-50 ng的纯化重组蛋白,仍可完成基础肽段覆盖率鉴定;对于亚微克级复杂组织裂解物,建议采用高通量DIA模式采集以保证覆盖深度。
标准分析报告包含材料与仪器型号、详细色谱质谱工作参数、质控SST判定、反卷积分子量或肽段匹配图谱、修饰定量结果以及统计学图表。报告格式规范严谨,支持直接提取用于SCI论文支撑材料(Supporting Information)或IND申报药学研究资料。
液体蛋白质溶液或组织裂解液务必加入适量蛋白酶/磷酸酶抑制剂,采用足量干冰(保证运输途中干冰不挥发完毕)密封冷链寄送;冻干粉末样本可在蓝冰低温或常温干燥避光条件下运输。送样前请先与平台技术人员确认样本形态。
填写您的样本基本形态与目标测定参数,资深分析化学师将在2小时内与您联系并提供前处理建议。